一、目的

1.掌握钼酸铵分光光度法的测定原理

2.掌握钼酸铵分光光度法测总磷的基本操作

二、原理

总磷包括水溶解的、悬浮物的、有机磷的和无机磷。在酸性介质中，正磷酸与钼酸铵反应，在锑盐存在下生成磷钼杂多酸后，立即被抗坏血酸还原，生成蓝色的络合物，在700nm波长下有最大吸收度。

三、仪器和试剂

仪器：50ml容量瓶10个，移液管25ml一支，吸量管：10ml1支，5ml2支，1ml一支。722型分光光度计一台，10mm比色皿。试剂：(1+1)硫酸，抗坏血酸，100g/L溶液；钼酸盐溶液；50.0µg/ml（以P计）磷标准储备溶液。抗坏血酸：溶解10g抗坏血酸（C6H8O6，C.P.）于水中，并稀释至100ml。此溶液储于棕色的试剂瓶中，在冷处可稳定几周。如不变色可长时间使用。钼酸盐溶液：溶解13g钼酸铵[(NH4)6Mo7024·4H20]于100ml水中。溶解0.35g酒石酸锑钾[KSbC4H4O7·1/2H2O，A.R]于100ml水中，在不断搅拌下把钼酸铵溶液徐徐加

300ml（1+1）硫酸(4.2)中，然后再加酒石酸锑钾溶液并且混合均匀。此溶液储于棕色瓶中，在冷处可保存二个月。磷标准储备溶液50.0µg/ml（P）：称0.2179±0.0001g于110℃干燥2小时在干燥器中放冷的磷酸二氢钾（KH2PO4，A.R），用水溶解后转移至1000ml容量瓶中。加入大约800ml水，加5ml硫酸（1+1）用水稀释至标线，摇匀。

四、实验内容：

1磷标准使用液：将10.00ml的磷标准溶液移至100ml容量瓶中，用水稀释至标线，混匀。浓度为5.00µg/ml（以P计）。

2.工作曲线的制作；取7支50ml容量瓶分别加入0.00，1.00，2.00，4.00，6.00，8.00，10.00ml，磷酸盐标准溶液，加水至40ml左右。分别加入2ml钼酸盐溶液，摇匀。30秒后加1ml抗坏血酸溶液再加水至50ml标线。充分混合均匀。15分钟后用10mm比色皿测定。以水做参比，在700nm处测定吸光度。扣除空白试验的吸光度后，以校正后的吸光度对应相应磷含量做出校准工作曲线。

3.样品的测定：配制水样品三份，分别取25.00ml样品于50ml容量瓶中，加入2ml钼酸盐溶液，摇匀。30秒后加1ml抗坏血酸溶液再加水至50ml标线。充分混合均匀。15分钟后用10mm或30mm比色皿测定。在700nm处以水做参比测定吸光度，扣除空白试验的吸光度后，从工作曲线查得磷的含量。

本信息由中科质检生物技术有限公司实验室研究员提供，技术仅供参考，不作为实验标准．